培養(yǎng)制備菌落鑒定細(xì)菌分析圖像顯微鏡廠家
魚(yú)類傳染性病原菌的分離與鑒定
魚(yú)類傳染性病原主要包括病毒、細(xì)菌、霉菌三大類。不同類群的病
原菌分離鑒定的具體方法不同。因此要分離鑒定種傳染性病原菌,首先
必須判別病原菌的種類,然后根據(jù)各類微生物病原體的分離鑒定步驟進(jìn)
行。本實(shí)驗(yàn)主要介紹魚(yú)類細(xì)菌性病原菌的分離鑒定過(guò)程
病原體材料的采取
進(jìn)行病原體分離,首先應(yīng)采到含有病原體較多的材料但究競(jìng)應(yīng)采取
何種樣品,則要根據(jù)魚(yú)類發(fā)生的癥狀、病變區(qū)和流行傳染狀況來(lái)確定。
通常以魚(yú)的血液與病變組織為樣
血液
一般應(yīng)選擇發(fā)病早期的血液為樣品。因晚期可能出現(xiàn)血清抗體而抑
制病原體的繁殖或破壞病原體的生存。取血樣,通常剖開(kāi)魚(yú)的心臟,抽
取血液
病變組織以慮病癥狀明顯的活魚(yú)或病死后不久的魚(yú)為對(duì)象,用無(wú)菌
手術(shù)法采下一小塊病變組織,迅速放入密閉的無(wú)菌容器。
培養(yǎng)甚的制備
材料處理與接種分離采到的材料如是血液,即可用適宜的平板培養(yǎng)
基直接劃線接種,分離培養(yǎng)成純培養(yǎng)物。如果是病變組織,則先用無(wú)菌
操作將樣品搗碎,加無(wú)菌生理鹽水制成液漿,然后進(jìn)行劃線分離培養(yǎng)。
若材料中所含的病原體很少,應(yīng)先接種到適宜的增殖培養(yǎng),中進(jìn)行增菌
。同時(shí)留1支無(wú)接種的對(duì)照管,一起放在22C下培養(yǎng)至與對(duì)照管有明顯混
濁差別時(shí)為止,挑取混濁增菌液在平板培養(yǎng)基涂抹或劃線分離,冉培養(yǎng)
于22°C直至長(zhǎng)出明顯的菌落。最后挑取可疑的單菌落分別接種于斜面
培養(yǎng)基,在適溫下培養(yǎng)至有顯著的菌替長(zhǎng)出后,冷藏供鑒定
病原體的鑒定
血清學(xué)凝集反應(yīng)
血清凝集反應(yīng)試驗(yàn)是鑒定病原體的重要方法之一,具體操作見(jiàn)第九
章。魚(yú)類病原體的鑒定一般采用玻片凝集法與試管沉淀法。
玻片凝集法在無(wú)縈載玻片一端加1滴稀釋至1:5的已知抗體免疫血清
,以無(wú)菌手術(shù)法取1滴待鑒定的病原體菌懸液加入血清中混合調(diào)勻。同
時(shí)在載玻片另端以無(wú)菌魚(yú)生理鹽水代替血清,加入同一待定的菌懸液1
滴,調(diào)勻作對(duì)照。2分鐘后,對(duì)比結(jié)果,加入血清后有凝集現(xiàn)象者為陽(yáng)性,
反之,無(wú)凝集現(xiàn)象者為陰性。
試管沉淀法
在12×100毫米的試管中,分別加入稀釋成不同濃度的已知抗體免疫
血清,成一濃度梯度系列。然后加入同一濃度的,定量的待鑒定病原體
菌懸液,放入25°C水溶箱經(jīng)24小時(shí)后觀察有無(wú)沉淀反應(yīng),從沉淀產(chǎn)生與
血清的稀釋度可知相應(yīng)的凝集效價(jià)。
致病感染反應(yīng)試驗(yàn)選血清反應(yīng)呈陽(yáng)性的菌株,進(jìn)行健康魚(yú)體致病感
染試驗(yàn),若能使同種健康魚(yú)感染后出現(xiàn)與自然狀況下病魚(yú)相同的病癥者
,方可確認(rèn)為某種疾病的病原菌感染方法可以根據(jù)疾病的可能感染途徑
采用不同的方法
